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Dynamica V18R Pro离心机在土壤 DNA提取中的应用
发布时间：2021/3/17 9:36:29 1322人看过 字号：大 中 小
研究表明，土壤中微生物的数量和种类都非常巨大，如果采用传统的划线纯化分离法来研究土壤微生物群落的数量和组成，那么其中 90%以上的微生物都无法覆盖到。因此，我们选择分子生物学的方法，从土壤中提取具有代表性的微生物 DNA，并进行相应的 PCR 扩增和测序。这对于我们揭示不同地区的土壤微生物种群分布和多样性来说有着重要的意义。
图3 V18R Pro离心机+FA15A转头
本次我们使用的Dynamica离心机V18R Pro和 FA15A (15,000rpm/21,500xg，24x1.5/2ml) 角转头，V18R Pro的所有转头都具有转头自锁功能，能够轻松装卸，同时所有转头都能够高温高压灭菌，极大地保障了使用者的安全性。
具体步骤：
一、土壤样本预处理：
1. 取 500 mg 土壤样本至研磨管中。
2. 加入 980 µL 缓冲液，轻柔涡旋混匀。
3. 加入 120 μL 裂解液。
4.将研磨管置于研磨仪中，40 Hz 处理 40 sec。
5.12000 rpm 离心 5 min，沉淀碎片颗粒。
6. 转移上清液至 2 mL 离心管中。加入 250 μL 去蛋白液，手动摇晃混匀。4℃放置 5 min。
7. 12000 rpm 离心 3 min，之后取不多于 900 μL 上清液，转移至 2 mL 离心管中。
8. 加入 1/3 体积的结合液，轻柔涡旋混匀。4℃放置 5 min。
9. 12000 rpm 室温离心 1 min。转移上清液至 5 mL 离心管中。
10. 加入 1.5 倍体积的缓冲液，立即吹打混匀。
二、DNA 提取：
1. 将 DNA 吸附柱套入 2 mL 收集管中，备用。
2. 将预处理混合液加入到 DNA 吸附柱中，12,000 rpm 室温离心 1min，弃掉废液。
3. 将 DNA 吸附柱放回收集管，加入 600 µL 漂洗液，12,000 rpm 室温离心 30 sec，弃废液。
4. 重复一遍步骤 3。
5. 将 DNA 吸附柱放回收集管，空柱 12,000 rpm 离心 2 min，以除去残 留的漂洗液。
6. 将 DNA 吸附柱放入新的洁净 1.5 mL 离心管中，在滤膜中央加入 30-100 µL 洗脱液，室温放置 3 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min，收集滤液即为样本 DNA。
7. DNA 样品可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
参考资料：
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